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SILAC定量蛋白質組學分析

  • 服務簡介

    SILAC(Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture)即細胞培養條件下穩定同位素標記技術,這種方法首先是由2002年丹麥Mann的實驗室對AACT技術做了進一步改進而獲得的,他們首次應用于定量蛋白質組研究,為全面、系統地定性和定量分析復雜細胞蛋白質組提供了有效的方案。

  • 技術原理

    SILAC的基本原理是分別用天然同位素(輕型)或穩定同位素(重型)標記的必需氨基酸取代細胞培養基中相應氨基酸,細胞經>6個倍增周期后,穩定同位素標記的氨基酸完全摻入到細胞新合成的蛋白質中取代了原有氨基酸。不同標記細胞的裂解蛋白按細胞數或蛋白量等比例混合,經分離、純化后進行質譜鑒定。其基本原理與技術流程如下圖所示:

    silac定量蛋白質組學分析


  • 儀器設備

    Thermo Scientific Q Exactive HF-X

    Thermo Scientific Orbitrap Fusion?Lumos

    Thermo Scientific Q Exactive Plus

    Thermo Scientific Orbitrap Fusion

    Thermo Scientific?Q Exactive


  • 技術優勢

    多個樣本混合后同時進行分離、酶切和鑒定,后續實驗對樣品的影響是一致的,減少了實驗操作和儀器設備引入的定量誤差;
    體內標記技術,標記不受裂解液成分影響,效果穩定,標記效率高達99%;

    可以對在DMEM、DMEM-F12、1640三種培養基中培養的多種細胞進行標記;

    靈敏度高,樣本量要求少。



  • 應用領域

    ? ? ? 疾病標志物篩選 ? ? ? ? ? ?
    ? ? ??作用機制研究
    ? ? ? 藥物作用靶點研究 ? ? ? ?
    ? ? ??特殊功能蛋白質篩選



  • 參考文獻

    [1] Kim JY, Welsh EA, et al. Dissection of TBK1 signaling via phosphoproteomics in lung cancer cells.ProcNatlAcadSci U S A.2013; 110(30): 12414-9.

    [2] Sobczyk GJ, Wang J, et al. SILAC-based proteomic quantification of chemoattractant-induced cytoskeleton dynamics on a second to minute timescale.?Nature Commun.2014; 5: 3319.

    [3] Ravikumar V, Shi L, et al. Quantitative phosphoproteome analysis of Bacillus subtilis reveals novel substrates of the kinase PrkC and phosphatase PrpC.?Mol Cell Proteomics. 2014 Jan 5.

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